Zweck und Anwendungsbereich:
Der Indol-Test ist ein qualitatives Verfahren zur Bestimmung der Fähigkeit von Bakterien, Indol durch Desaminierung von Tryptophan zu produzieren.
Bei der Kovacs-Methode verbindet sich Indol in Gegenwart eines Tryptophan-reichen Mediums mit p-Dimethylaminobenzaldehyd bei einem sauren pH-Wert in Alkohol zu einer rot-violetten Verbindung.
Reagenzien und Verbrauchsmaterialien:
- Indol-Kovacs-Reagenz
- Filterpapier
- Sterile Impföse oder -stab
Qualitätskontrolle:
Die Qualitätskontrolle wird an jedem Tag der Testdurchführung durchgeführt. Verwenden Sie das Verfahren mit einer Stammkultur von E. coli ATCC 25922 (Indol-positiv) und P aeruginosa ATCC 27853 (Indol-negativ).
Vermerken Sie die QC-Ergebnisse im Indol-Test-QC-Protokoll.
Vorgehensweise
- Legen Sie ein kleines Quadrat aus Filterpapier auf ein Parafilm-Quadrat gleicher Größe.
- Tragen Sie 2-3 Tropfen Indol-Kovacs-Reagenz auf das Filterpapier auf.
- Mit einer sterilen Impfschlaufe oder einem hölzernen Applikatorstäbchen nehmen Sie einen Teil einer 18-24 Stunden isolierten Kolonie von einer Blutagarplatte und reiben ihn auf den mit Reagenz gesättigten Bereich des Filterpapiers.
- Eine positive Kovacs-Testreaktion wird durch das Auftreten einer rosafarbenen bis roten Färbung angezeigt.
- Vermerken Sie das Ergebnis im mikrobiologischen Kulturprotokoll.
- Entsorgen Sie alle Abfälle in einem Biohazard-Beutel. Legen Sie hölzerne Applikatorstäbchen in den Behälter für scharfe Gegenstände.
Beschränkungen
Indol-Tests können als Hilfsmittel zur Identifizierung und Differenzierung von grampositiven und gramnegativen Organismen verwendet werden. Für eine vollständige Identifizierung wird eine zusätzliche biochemische Untersuchung mit Reinkulturen empfohlen.
Der Röhrchentest ist eine empfindlichere Methode zum Nachweis von Indol als der Spot-Test.
Bei der Durchführung eines Stichtests kann Kovacs Indol-Reagenz als Ersatz für das Stichtestreagenz verwendet werden. Allerdings ist das Kovacs Indol-Reagenz, wenn es als Spottest-Reagenz verwendet wird, weniger empfindlich beim Nachweis von Indol als das Indol-Spot-Reagenz (DMACA).
Kovacs Indol-Reagenz wird nicht zur Verwendung mit anaeroben Bakterien empfohlen. Das Indol Spot Reagenz (DMACA) ist für die Verwendung mit Anaerobiern geeignet.
Da Peptone nachweislich hinsichtlich ihrer Eignung für die Indolbestimmung variieren, sollten Medien, die für die Indolbestimmung ausgewählt werden, mit bekannten positiven und negativen Organismen getestet werden, um die Eignung sicherzustellen.
Glukosehaltige Medien sollten nicht für die Indolbestimmung verwendet werden, da sie saure Endprodukte bilden, die nachweislich die Indolproduktion reduzieren. Mueller Hinton Agar sollte ebenfalls nicht für diesen Test verwendet werden, da Tryptophan während der sauren Hydrolyse von Casein zerstört wird.
Farbstoffhaltige Medien wie MacConkey und EMB sind ungeeignete Quellen für das Inokulum aufgrund möglicher Farbstoffverschleppung und anschließender Störung der Indol-Farbinterpretation.
Indol-positive Kolonien haben berichtet, dass benachbarte Indol-negative Kolonien aufgrund der Diffusion von Indol in das Medium falsch-positiv erscheinen. Um falsch-positive Ergebnisse zu vermeiden, wählen Sie Kolonien mit unterschiedlicher Morphologie, die mindestens 5 mm voneinander entfernt sind, für den Indol-Test aus.