Objectif et portée :

Le test de l’indole est une procédure qualitative permettant de déterminer la capacité des bactéries à produire de l’indole par désamination du tryptophane.

En utilisant la méthode de Kovacs, l’indole se combine, en présence d’un milieu riche en tryptophane, avec le p-Diméthylaminobenzaldéhyde à un pH acide dans l’alcool pour produire un composé rouge-violet.

Réactifs et fournitures :

• Réactif Indole Kovacs
• Papier filtre
• Boucle ou bâtonnet d’inoculation stérile

Contrôle de qualité :

Le contrôle de qualité est effectué chaque jour où le test est réalisé. Utilisez la procédure avec une culture mère d’E. coli ATCC 25922 (indole positif) et de P aeruginosa ATCC 27853 (indole négatif).

Signalez les résultats du CQ sur le journal du CQ du test à l’indole.

Procédure

1. Placez un petit carré de papier filtre sur un carré de parafilm de même taille.
2. Placez 2 à 3 gouttes de réactif Indole Kovacs sur le papier filtre.
3. Avec une anse d’inoculation stérile ou un bâtonnet applicateur en bois, prélever une partie d’une colonie isolée à 18-24 heures sur une plaque de gélose au sang, et la frotter sur la zone saturée de réactif du papier filtre.
4. Une réaction positive au test de Kovacs est dénotée par l’apparition d’un rose à rouge .
5. Enregistrer le résultat dans le journal de travail des cultures microbiologiques.
6. Éliminer tous les déchets dans un sac à risque biologique. Placer les bâtonnets applicateurs en bois dans le conteneur à objets tranchants.

LIMITATIONS

Les tests indoliques peuvent être utilisés comme aide à l’identification et à la différenciation des organismes gram-positifs et gram-négatifs. Des tests biochimiques supplémentaires utilisant des cultures pures sont recommandés pour une identification complète.

Le test en tube est une méthode plus sensible de détection de l’indole que le test ponctuel.

Lorsqu’on effectue un test ponctuel, le réactif de l’indole de Kovacs peut être utilisé en remplacement du réactif du test ponctuel. Cependant, le réactif à l’indole de Kovacs, lorsqu’il est utilisé comme réactif du test ponctuel, est moins sensible pour détecter l’indole que le réactif ponctuel à l’indole (DMACA).

Le réactif à l’indole de Kovacs n’est pas recommandé pour une utilisation avec des bactéries anaérobies. Le réactif indole Spot (DMACA) est adapté à une utilisation avec des anaérobies.

Puisqu’il a été démontré que les peptones varient en ce qui concerne leur aptitude à être utilisées pour le test de l’indole, les milieux sélectionnés pour la détermination de l’indole doivent être testés avec des organismes positifs et négatifs connus afin d’assurer leur aptitude.

Les milieux contenant du glucose ne doivent pas être utilisés pour le test de l’indole en raison de la formation de produits finaux acides dont il a été démontré qu’ils réduisent la production d’indole. La gélose Mueller Hinton ne doit pas non plus être utilisée pour ce test car le tryptophane est détruit au cours de l’hydrolyse acide de la caséine.

Les milieux contenant des colorants, tels que MacConkey et EMB, ne sont pas des sources d’inoculum appropriées en raison d’un éventuel entraînement du colorant et d’une interférence subséquente dans l’interprétation de la couleur de l’indole.

Les colonies indole-positives ont été signalées comme entraînant des colonies indole-négatives adjacentes à apparaître faussement positives en raison de la diffusion de l’indole dans les milieux. Pour éviter les faux positifs, sélectionnez des colonies de morphologies différentes séparées d’au moins 5 mm pour le test à l’indole.

Les colonies positives à l’indole sont des colonies qui ont une morphologie différente.