Scopo e ambito:

Il test dell’indolo è una procedura qualitativa per determinare la capacità dei batteri di produrre indolo mediante deaminazione del triptofano.

Con il metodo Kovacs, l’indolo si combina, in presenza di un mezzo ricco di triptofano, con la p-dimetilamminobenzaldeide a un pH acido in alcool per produrre un composto rosso-violetto.

Reagenti e materiali di consumo:

• Reagente Indolo Kovacs
• Carta da filtro
• Avvolgimento sterile per inoculazione

Controllo di qualità:

Il controllo di qualità viene eseguito ogni giorno in cui viene eseguito il test. Utilizzare la procedura con colture stock di E. coli ATCC 25922 (indolo positivo) e P aeruginosa ATCC 27853 (indolo negativo).

Registrare i risultati del QC sul registro QC del test Indole.

Procedura

1. Posizionare un piccolo quadrato di carta da filtro su un quadrato di parafilm delle stesse dimensioni.
2. Posizionare 2-3 gocce di reagente Indole Kovacs sulla carta da filtro.
3. Con un’ansa inoculante sterile o un bastoncino applicatore di legno, prelevare una porzione di una colonia isolata a 18-24 ore da una piastra di agar sangue, e strofinarla sull’area satura di reagente della carta da filtro.
4. Una reazione positiva al test di Kovacs è denotata dalla comparsa di un colore da rosa a rosso.
5. Registrare il risultato nel registro di lavoro della coltura microbiologica.
6. Smaltire tutti i rifiuti nel sacchetto per il rischio biologico. Mettere i bastoncini di legno dell’applicatore in un contenitore per oggetti taglienti.

Limitazioni

I test indolici possono essere usati come aiuto nell’identificazione e nella differenziazione di organismi gram-positivi e gram-negativi. Per un’identificazione completa si raccomandano ulteriori test biochimici utilizzando colture pure.

Il test in provetta è un metodo più sensibile per rilevare l’indolo rispetto allo spot test.

Quando si esegue un test spot, il reagente Kovacs Indole può essere utilizzato come sostituto del reagente del test spot. Tuttavia, Kovacs Indole Reagent, se usato come reagente per lo spot test, è meno sensibile nel rilevare l’indolo rispetto all’Indole Spot Reagent (DMACA).

Kovacs Indole Reagent non è raccomandato per l’uso con batteri anaerobi. Il reagente Indole Spot Reagent (DMACA) è adatto all’uso con gli anaerobi.

Siccome è stato dimostrato che i peptoni variano per quanto riguarda la loro idoneità all’uso nei test dell’indolo, i terreni selezionati per la determinazione dell’indolo dovrebbero essere testati con organismi noti positivi e negativi per assicurare l’idoneità.

I terreni contenenti glucosio non dovrebbero essere usati per i test dell’indolo a causa della formazione di prodotti finali acidi che hanno dimostrato di ridurre la produzione di indolo. Anche Mueller Hinton Agar non dovrebbe essere usato per questo test perché il triptofano viene distrutto durante l’idrolisi acida della caseina.

I terreni contenenti coloranti, come MacConkey e EMB, non sono fonti di inoculo adatte a causa del possibile trasporto del colorante e della conseguente interferenza nell’interpretazione del colore dell’indolo.

Sono state riportate colonie indolo-positive che fanno apparire false positive le colonie adiacenti indolo-negative a causa della diffusione dell’indolo nei terreni. Per evitare falsi positivi, selezionare colonie di diversa morfologia separate da almeno 5 mm per il test dell’indolo.