Panoramica

Il Western blotting è una tecnica fondamentale nella biologia cellulare e molecolare, che viene utilizzata per rilevare la presenza di una proteina specifica in una miscela complessa estratta dalle cellule. Come evidenziato dalla figura 1 qui sotto, la procedura di Western blotting si basa su tre elementi chiave per svolgere questo compito: la separazione di miscele di proteine per dimensioni utilizzando l’elettroforesi su gel; il trasferimento efficiente delle proteine separate su un supporto solido; e la rilevazione specifica di una proteina bersaglio da anticorpi adeguatamente abbinati. Una volta rilevata, la proteina bersaglio sarà visualizzata come una banda su una membrana di blotting, una pellicola a raggi X o un sistema di imaging.

Figura 1: Separazione di miscele di proteine mediante elettroforesi; trasferimento su una membrana di blotting; e rilevamento della proteina bersaglio, che diventa visibile solo nella fase finale come una banda simile a quella mostrata nella corsia 3. Corsia 1: Standard di peso molecolare precolorati. Corsia 2 & 3: Miscele di proteine

Siccome il Western blotting si esegue rapidamente, usando attrezzature semplici e reagenti poco costosi, è una delle tecniche di laboratorio più comuni. I risultati ottenuti sono anche facili da interpretare, unici e non ambigui. Pertanto, viene utilizzato di routine da solo, o insieme ad altri test immunologici, nella ricerca e nelle impostazioni cliniche.