Purpose and Scope:
インドールテストは、トリプトファンの脱アミノ化によってインドールを産生するバクテリアの能力を決定するための定性的な手順です。
Kovacs法を用いて、インドールはトリプトファンの豊富な培地の存在下で、アルコール中の酸性pHでp-ジメチルアミノベンズアルデヒドと結合し、赤紫色の化合物を産生します。
試薬および消耗品。
- Indole Kovacs Reagent
- Filter paper
- Sterile inoculating loop or stick
Quality Control:
QCはテストが行われる各日に行われます。 E. coli ATCC 25922（インドール陽性）とP aeruginosa ATCC 27853（インドール陰性）のストックカルチャーを用いて手順を行う。
インドールテストQCログにQC結果を記録する。
手順
- 同じ大きさのパラフィルムの上に小さな正方形のろ紙を置く。
- ろ紙の上にIndole Kovacs Reagentを2-3滴置く。
- 滅菌した接種用ループまたは木製アプリケータースティックを用いて、血液寒天プレートから18～24時間隔離されたコロニーの一部を摘出し、ろ紙の試薬が飽和した部分にこすりつける。
- コバックステストの陽性反応は、ピンクから赤の外観で示されます。
- 微生物学的培養作業記録に結果を記録します。
- すべての廃棄物をバイオハザードバッグに入れて廃棄します。
制限事項
インドールテストは、グラム陽性菌とグラム陰性菌の識別と区別の補助として使用することができます。
チューブ・テストはスポット・テストよりもインドールを検出する感度の高い方法です。
スポットテストを行う際に、コバックスインドール試薬をスポットテスト試薬の代わりに使用することができます。
スポットテストを行う際、Kovacsインドール試薬をスポットテスト試薬の代わりに使用することができますが、Kovacsインドール試薬をスポットテスト試薬として使用した場合、インドールスポット試薬(DMACA)よりもインドールの検出感度が低くなります。
インドールスポット試薬（DMACA）は嫌気性菌の使用に適しています。
ペプトンはインドール試験での使用に適しているかどうかに関して異なることが示されているので、インドール測定用に選択された培地は、適合性を保証するために既知の陽性および陰性の生物でテストされるべきです。
グルコースを含む培地は、インドール生産を減少させることが示されている酸の最終生成物の形成のため、インドール試験には使用しないでください。
MacConkeyやEMBなどの色素を含む培地は、色素がキャリーオーバーしてインドールの色の解釈に支障をきたす可能性があるため、接種源としては適していません。
インドール陽性のコロニーは、培地中へのインドールの拡散により、隣接するインドール陰性のコロニーを偽陽性に見せることが報告されています。
インドール陽性のコロニーは、隣接するインドール陰性のコロニーがメディアに拡散して偽陽性となることが報告されている。偽陽性を避けるためには、形態の異なるコロニーを5mm以上離してインドール検査を行う。