Fins e Âmbito:

O teste de indole é um procedimento qualitativo para determinar a capacidade das bactérias de produzir indole por desaminação de triptofano.

Utilizando o método Kovacs, o indole combina, na presença de um meio rico em triptofano, com p-Dimetilaminobenzaldeído a um pH ácido em álcool para produzir um composto vermelho-violeta.

Reagentes e Suprimentos:

  • Reagente Indolo Kovacs
  • Papel de filtro
  • Laço ou bastão de inoculação estéril

Controlo de qualidade:

QC é realizado em cada dia em que o teste é realizado. Utilizar procedimento com cultura de reserva de E. coli ATCC 25922 (indole positivo) e P aeruginosa ATCC 27853 (indole negativo).

Recordar resultados de CQ no Registo de CQ do Teste Indolétrico.

Procedimento

  1. Colocar um pequeno quadrado de papel de filtro num quadrado de parafilme do mesmo tamanho.
  2. Colocar 2-3 gotas de Reagente Indole Kovacs no papel de filtro.
  3. Com um laço inoculante esterilizado ou um bastão aplicador de madeira, colha uma porção de uma colónia isolada de 18-24 horas de uma placa de ágar sangue, e esfrega-a na área saturada do reagente do papel de filtro.
  4. Uma reacção positiva do teste de Kovacs é denotada pelo aparecimento de um rosa a vermelho .
  5. Recordar o resultado no registo de trabalho de cultura microbiológica.
  6. Disponibilizar todos os resíduos no saco de risco biológico. Colocar paus aplicadores de madeira em contentor de tubérculos.

LIMITAÇÕES

Testes indolares podem ser utilizados como ajuda na identificação e diferenciação de organismos gram-positivos e gram-negativos. Recomenda-se a realização de testes bioquímicos adicionais utilizando culturas puras para uma identificação completa.

O teste em tubo é um método mais sensível de detecção do indole do que o teste pontual.

Ao realizar um teste pontual, o Reagente Indol Kovacs pode ser utilizado como um substituto do reagente de teste pontual. Contudo, o Reagente Indol Kovacs, quando usado como reagente de teste pontual, é menos sensível na detecção do indole do que o Reagente Indolétrico (DMACA).

Reagente Indolétrico Kovacs não é recomendado para utilização com bactérias anaeróbias. O Reagente Indole Spot (DMACA) é adequado para utilização com anaeróbios.

P>Peptones demonstraram variar no que diz respeito à sua adequação para utilização com testes de indole, os meios seleccionados para determinação de indole devem ser testados com organismos positivos e negativos conhecidos para assegurar a sua adequação.

Meios contendo glucose não devem ser utilizados para testes de indole devido à formação de produtos finais ácidos que demonstraram reduzir a produção de indole. Mueller Hinton Agar também não deve ser utilizado para este teste porque o triptofano é destruído durante a hidrólise ácida da caseína.

Meios contendo corante, tais como MacConkey e EMB, são fontes inadequadas de inóculo devido à possível transferência de corante e subsequente interferência da interpretação da cor indole.

Colónias indolo-positivas têm sido relatadas como fazendo com que colónias adjacentes indole-negativas pareçam falso-positivas devido à difusão do indole nos meios. Para evitar falso-positivos, seleccionar colónias de morfologias diferentes que são separadas por pelo menos 5mm para testes de indole.

Deixe uma resposta

O seu endereço de email não será publicado. Campos obrigatórios marcados com *