Fins e Âmbito:
O teste de indole é um procedimento qualitativo para determinar a capacidade das bactérias de produzir indole por desaminação de triptofano.
Utilizando o método Kovacs, o indole combina, na presença de um meio rico em triptofano, com p-Dimetilaminobenzaldeído a um pH ácido em álcool para produzir um composto vermelho-violeta.
Reagentes e Suprimentos:
- Reagente Indolo Kovacs
- Papel de filtro
- Laço ou bastão de inoculação estéril
Controlo de qualidade:
QC é realizado em cada dia em que o teste é realizado. Utilizar procedimento com cultura de reserva de E. coli ATCC 25922 (indole positivo) e P aeruginosa ATCC 27853 (indole negativo).
Recordar resultados de CQ no Registo de CQ do Teste Indolétrico.
Procedimento
- Colocar um pequeno quadrado de papel de filtro num quadrado de parafilme do mesmo tamanho.
- Colocar 2-3 gotas de Reagente Indole Kovacs no papel de filtro.
- Com um laço inoculante esterilizado ou um bastão aplicador de madeira, colha uma porção de uma colónia isolada de 18-24 horas de uma placa de ágar sangue, e esfrega-a na área saturada do reagente do papel de filtro.
- Uma reacção positiva do teste de Kovacs é denotada pelo aparecimento de um rosa a vermelho .
- Recordar o resultado no registo de trabalho de cultura microbiológica.
- Disponibilizar todos os resíduos no saco de risco biológico. Colocar paus aplicadores de madeira em contentor de tubérculos.
LIMITAÇÕES
Testes indolares podem ser utilizados como ajuda na identificação e diferenciação de organismos gram-positivos e gram-negativos. Recomenda-se a realização de testes bioquímicos adicionais utilizando culturas puras para uma identificação completa.
O teste em tubo é um método mais sensível de detecção do indole do que o teste pontual.
Ao realizar um teste pontual, o Reagente Indol Kovacs pode ser utilizado como um substituto do reagente de teste pontual. Contudo, o Reagente Indol Kovacs, quando usado como reagente de teste pontual, é menos sensível na detecção do indole do que o Reagente Indolétrico (DMACA).
Reagente Indolétrico Kovacs não é recomendado para utilização com bactérias anaeróbias. O Reagente Indole Spot (DMACA) é adequado para utilização com anaeróbios.
P>Peptones demonstraram variar no que diz respeito à sua adequação para utilização com testes de indole, os meios seleccionados para determinação de indole devem ser testados com organismos positivos e negativos conhecidos para assegurar a sua adequação.
Meios contendo glucose não devem ser utilizados para testes de indole devido à formação de produtos finais ácidos que demonstraram reduzir a produção de indole. Mueller Hinton Agar também não deve ser utilizado para este teste porque o triptofano é destruído durante a hidrólise ácida da caseína.
Meios contendo corante, tais como MacConkey e EMB, são fontes inadequadas de inóculo devido à possível transferência de corante e subsequente interferência da interpretação da cor indole.
Colónias indolo-positivas têm sido relatadas como fazendo com que colónias adjacentes indole-negativas pareçam falso-positivas devido à difusão do indole nos meios. Para evitar falso-positivos, seleccionar colónias de morfologias diferentes que são separadas por pelo menos 5mm para testes de indole.