Doel en reikwijdte:

De indooltest is een kwalitatieve procedure voor het bepalen van het vermogen van bacteriën om indool te produceren door deaminatie van tryptofaan.

Met behulp van de Kovacs-methode combineert indool zich, in aanwezigheid van een tryptofaanrijk medium, met p-Dimethylaminobenzaldehyde bij een zure pH in alcohol tot een rood-violette verbinding.

Reagenten en benodigdheden:

• Indole Kovacs Reagent
• Filterpapier
• Steriele inoculatielus of stick

Kwaliteitscontrole:

QC wordt uitgevoerd op elke dag dat de test wordt uitgevoerd. Gebruik de procedure met een voorraadcultuur van E. coli ATCC 25922 (indoolpositief) en P aeruginosa ATCC 27853 (indoolnegatief).

Registreer de QC-resultaten op het QC-logboek van de indooltest.

Procedure

1. Plaats een klein vierkantje filtreerpapier op een vierkantje parafilm van dezelfde grootte.
2. Plaats 2-3 druppels Indole Kovacs Reagent op het filtreerpapier.
3. Pluk met een steriele inoculatielus of houten applicatorstokje een deel van een 18-24 uur geïsoleerde kolonie van een bloedagarplaat, en wrijf dit op het met reagens verzadigde gedeelte van het filtreerpapier.
4. Een positieve Kovacs-testreactie wordt aangegeven door het verschijnen van een roze tot rode kleur.
5. Registreer het resultaat in het microbiologische cultuurwerklogboek.
6. Verwijder al het afval in de biohazardzak. Plaats houten applicatorstaafjes in de container voor scherpe voorwerpen.

LIMITATIES

Indole tests kunnen worden gebruikt als hulpmiddel bij de identificatie en differentiatie van gram-positieve en gram-negatieve organismen. Voor een volledige identificatie wordt aanvullend biochemisch onderzoek met behulp van reinculturen aanbevolen.

De buisjestest is een gevoeligere methode voor het opsporen van indool dan de spottest.

Bij het uitvoeren van een spottest kan Kovacs Indole Reagent worden gebruikt als vervanging voor het spottestreagens. Echter, Kovacs Indole Reagent, wanneer gebruikt als de spot-test reagens, is minder gevoelig in het opsporen van indool dan de Indole Spot Reagent (DMACA).

Kovacs Indole Reagent wordt niet aanbevolen voor gebruik met anaërobe bacteriën. Het Indole Spot Reagent (DMACA) is geschikt voor gebruik bij anaerobe bacteriën.

Omdat is aangetoond dat peptonen verschillen met betrekking tot hun geschiktheid voor gebruik bij indooltesten, moeten media geselecteerd voor indoolbepaling worden getest met bekende positieve en negatieve organismen om de geschiktheid te verzekeren.

Media die glucose bevatten, mogen niet worden gebruikt voor indooltesten vanwege de vorming van zure eindproducten waarvan is aangetoond dat ze de indoolproductie verminderen. Mueller Hinton Agar mag ook niet worden gebruikt voor deze test omdat tryptofaan wordt vernietigd tijdens zure hydrolyse van caseïne.

Media die kleurstof bevatten, zoals MacConkey en EMB, zijn ongeschikte bronnen van inoculum vanwege mogelijke carry-over van kleurstof en daaropvolgende interferentie van indool kleurinterpretatie.

Indole-positieve kolonies zijn gemeld om aangrenzende indool-negatieve kolonies vals-positief te laten lijken als gevolg van diffusie van indool in de media. Om vals-positieve resultaten te voorkomen, selecteert u voor de indooltest kolonies met een verschillende morfologie die ten minste 5 mm van elkaar verwijderd zijn.