La microscopía confocal ofrece muchas ventajas sobre la microscopía de campo amplio convencional para las aplicaciones de las ciencias de la vida. Permite el control de la profundidad de campo y la capacidad de recoger secciones ópticas en serie de muestras gruesas. La microscopía confocal puede utilizarse para crear imágenes en 3D de las estructuras internas de las células. El examen de estas estructuras puede ayudar a los investigadores a observar el funcionamiento interno de los procesos celulares.
En los microscopios ópticos de campo amplio convencionales, la fluorescencia secundaria emitida por una muestra suele producirse a través del volumen excitado y oscurece la resolución de las características que se encuentran en el plano focal del objetivo. Los especímenes más gruesos presentan un grado de fluorescencia tan elevado que se pierde gran parte de los detalles. Las técnicas de filtrado espacial eliminan la luz desenfocada en las muestras cuyo grosor supera el plano de enfoque inmediato.
Avances en la microscopía confocal
El escaneo láser confocal y la microscopía confocal de disco giratorio permiten a los investigadores generar imágenes en 3D de los orgánulos dentro de las células vivas. Se pueden obtener imágenes de alta calidad a partir de muestras preparadas para la microscopía de fluorescencia convencional. También hay un número creciente de aplicaciones de biología celular que requieren la obtención de imágenes de células y tejidos tanto fijos como vivos.
Los avances recientes en microscopía confocal han hecho posible vistas multidimensionales de células y tejidos vivos que incluyen información de la imagen en 3D a lo largo del tiempo. Esta información se presenta en múltiples colores. Disponer de datos temporales recogidos a partir de experimentos de lapso de tiempo o mediante la adquisición de imágenes en tiempo real es una poderosa herramienta para la biología celular. Las capacidades de la microscopía confocal aumentan a medida que se desarrollan nuevos sistemas láser para limitar el daño celular y a medida que aumentan las velocidades de procesamiento informático y las capacidades de almacenamiento.
Microscopía confocal de escaneo láser
La principal ventaja de la microscopía confocal de escaneo láser es producir secciones ópticas finas a través de muestras fluorescentes que tienen un grosor superior a 50 micrómetros. Las imágenes se recogen coordinando los cambios incrementales en el mecanismo de enfoque fino del microscopio (mediante un motor de pasos) con la adquisición secuencial de imágenes en cada paso.
El contraste y la definición mejoran considerablemente con respecto a otras técnicas debido a la reducción de la fluorescencia de fondo y a la mejora de la relación señal/ruido. También se eliminan los artefactos que se producirían durante el seccionamiento físico o la tinción fluorescente mediante seccionamiento óptico. Las muestras vivas pueden examinarse en diversas condiciones con mayor claridad.
Microscopía confocal de disco giratorio
El microscopio confocal de disco giratorio permite a los investigadores utilizar niveles de luz más bajos y obtener una fisiología celular más precisa con menores concentraciones de fluoróforos. Las ventajas de ofrecer imágenes de mayor eficiencia a potencias de láser más bajas incluyen menos fotoblanqueo, fototoxicidad, y es menos costoso que los microscopios de escaneo láser confocal.
Las numerosas ventajas que ofrece la microscopía confocal sobre la microscopía de campo amplio convencional para aplicaciones de ciencias de la vida ayuda a los investigadores a observar el funcionamiento interno de los procesos celulares.
Aprenda por qué la óptica es importante para la visión artificial y las ciencias de la vida visitando visiononline.org.