Propósito y alcance:
La prueba del indol es un procedimiento cualitativo para determinar la capacidad de las bacterias de producir indol por desaminación del triptófano.
Con el método de Kovacs, el indol se combina, en presencia de un medio rico en triptófano, con p-Dimetilaminobenzaldehído a un pH ácido en alcohol para producir un compuesto rojo-violeta.
Reactivos y suministros:
- Reactivo de Indol Kovacs
- Papel de filtro
- Bucle o bastón de inoculación estéril
Control de calidad:
El control de calidad se realiza cada día que se realiza la prueba. Utilice el procedimiento con el cultivo de reserva de E. coli ATCC 25922 (indol positivo) y P aeruginosa ATCC 27853 (indol negativo).
Registre los resultados del control de calidad en el registro de control de calidad del ensayo de indol.
Procedimiento
- Colocar un pequeño cuadrado de papel de filtro sobre un cuadrado de parafilm del mismo tamaño.
- Colocar 2-3 gotas de Reactivo Kovacs Indole sobre el papel de filtro.
- Con un bucle de inoculación estéril o un palito aplicador de madera, recoja una porción de una colonia aislada de 18 a 24 horas de una placa de agar sangre, y frótela sobre la zona saturada de reactivo del papel de filtro.
- Una reacción positiva a la prueba de Kovacs se denota por la aparición de un color entre rosa y rojo.
- Anote el resultado en el registro de trabajo de cultivo de microbiología.
- Deseche todos los residuos en una bolsa de riesgo biológico. Coloque los palos aplicadores de madera en el contenedor de objetos punzantes.
LIMITACIONES
Las pruebas de indol pueden utilizarse como ayuda en la identificación y diferenciación de organismos grampositivos y gramnegativos. Se recomienda realizar pruebas bioquímicas adicionales utilizando cultivos puros para una identificación completa.
La prueba del tubo es un método más sensible para detectar indoles que la prueba puntual.
Cuando se realiza una prueba puntual, se puede utilizar Kovacs Indole Reagent como sustituto del reactivo de la prueba puntual. Sin embargo, Kovacs Indole Reagent, cuando se utiliza como reactivo de la prueba puntual, es menos sensible en la detección de indol que el Indole Spot Reagent (DMACA).
Kovacs Indole Reagent no se recomienda para su uso con bacterias anaerobias. El Indole Spot Reagent (DMACA) es adecuado para el uso con anaerobios.
Dado que se ha demostrado que las peptonas varían en cuanto a su idoneidad para el uso con pruebas de indol, los medios seleccionados para la determinación de indol deben probarse con organismos positivos y negativos conocidos para asegurar su idoneidad.
Los medios que contienen glucosa no deben utilizarse para pruebas de indol debido a la formación de productos finales ácidos que han demostrado reducir la producción de indol. El agar Mueller Hinton tampoco debe utilizarse para esta prueba porque el triptófano se destruye durante la hidrólisis ácida de la caseína.
Los medios que contienen colorante, como MacConkey y EMB, no son fuentes adecuadas de inóculo debido al posible arrastre del colorante y a la posterior interferencia de la interpretación del color del indol.
Se ha informado de que las colonias indol-positivas hacen que las colonias adyacentes indol-negativas aparezcan como falsas positivas debido a la difusión del indol en los medios. Para evitar falsos positivos, seleccione colonias de diferentes morfologías que estén separadas por al menos 5 mm para la prueba de indol.