Cel i zakres:

Test indolowy jest procedurą jakościową służącą do oznaczania zdolności bakterii do wytwarzania indolu poprzez deaminację tryptofanu.

Przy zastosowaniu metody Kovacsa, indol łączy się, w obecności podłoża bogatego w tryptofan, z p-Dimetyloaminobenzaldehydem przy kwaśnym pH w alkoholu w celu wytworzenia czerwono-fioletowego związku.

Odczynniki i materiały:

• Odczynnik indolowy Kovacsa
• Bibuła filtracyjna
• Jałowa pętla lub pałeczka do inokulacji

Kontrola jakości:

Kontrola jakości jest wykonywana każdego dnia, w którym przeprowadzany jest test. Stosować procedurę z hodowlami E. coli ATCC 25922 (indol dodatni) i P aeruginosa ATCC 27853 (indol ujemny).

Zapisać wyniki QC w Dzienniku QC testu indolowego.

Procedura

1. Umieść mały kwadrat bibuły filtracyjnej na kwadracie folii parafilmowej o tym samym rozmiarze.
2. Umieść 2-3 krople odczynnika Indole Kovacsa na bibule filtracyjnej.
3. Za pomocą sterylnej pętli inokulacyjnej lub drewnianego aplikatora pobrać fragment kolonii wyizolowanej w ciągu 18-24 godzin z płytki z krwią i rozetrzeć go na nasyconej odczynnikiem powierzchni bibuły filtracyjnej.
4. Dodatnia reakcja testu Kovacsa jest sygnalizowana pojawieniem się różowego lub czerwonego zabarwienia
5. Zapisać wynik w dzienniku badań mikrobiologicznych.
6. Wyrzucić wszystkie odpady do worka na odpady niebezpieczne. Umieścić drewniane patyczki aplikatora w pojemniku na ostre narzędzia.

LIMITACJE

Testy indolowe mogą być stosowane jako pomoc w identyfikacji i różnicowaniu organizmów Gram-dodatnich i Gram-ujemnych. W celu pełnej identyfikacji zaleca się przeprowadzenie dodatkowych badań biochemicznych z użyciem czystych kultur.

Test probówkowy jest bardziej czułą metodą wykrywania indolu niż test punktowy.

Przy wykonywaniu testu plamkowego można użyć odczynnika Kovacsa Indole Reagent jako substytutu odczynnika do testu plamkowego. Jednakże, odczynnik indolowy Kovacsa, stosowany jako odczynnik do testu plamkowego, jest mniej czuły w wykrywaniu indolu niż odczynnik do testu indolowego (DMACA).

Odczynnik indolowy Kovacsa nie jest zalecany do stosowania z bakteriami beztlenowymi. Odczynnik Indole Spot Reagent (DMACA) jest odpowiedni do stosowania z bakteriami beztlenowymi.

Ponieważ wykazano, że peptony różnią się pod względem przydatności do badania indolu, podłoża wybrane do oznaczania indolu powinny być badane ze znanymi organizmami dodatnimi i ujemnymi, aby zapewnić ich przydatność.

Podłoża zawierające glukozę nie powinny być stosowane do badania indolu ze względu na tworzenie się kwaśnych produktów końcowych, które, jak wykazano, zmniejszają produkcję indolu. Podłoże Mueller Hinton Agar również nie powinno być używane do tego badania, ponieważ tryptofan jest niszczony podczas kwaśnej hydrolizy kazeiny.

Podłoża zawierające barwnik, takie jak MacConkey i EMB, są nieodpowiednimi źródłami inokulum ze względu na możliwe przeniesienie barwnika i późniejsze zakłócenie interpretacji koloru indolu.

Odnotowano, że kolonie indolododatnie powodują, że sąsiadujące kolonie indolo-ujemne wydają się fałszywie dodatnie z powodu dyfuzji indolu do podłoża. Aby uniknąć wyników fałszywie dodatnich, należy wybrać do badania indolowego kolonie o różnej morfologii, oddzielone od siebie o co najmniej 5 mm.